Klorofil, yüksek bitkilerde ve diğer tüm fotosentetik organizmalarda bulunan yeşil bir pigmenttir. Klorofil A ve klorofil B, etanol, eter ve asetonda ve suda ve petrol eterinde çözünmeyen diğer çözücülerde çözünür, bu nedenle klorofil çıkarmak için aseton, metanol, etanol, etil asetat ve benzeri gibi polar çözücüler kullanabilir.
Klorofil ekstraksiyon işlemi:
Klorofil ekstraksiyonu 25 derece C'de yarı karanlık bir odada hazırlanır. Ekstraksiyon adımları aşağıdaki gibidir:
(1) 1000 gram taze yeşil yaprak alın ve bir Wechsler'de ezin.
(2) Ezilmiş 1000 gram yeşil yaprağı, filtreleme ve temizlemeden sonra yaprak parçaları renksiz olana kadar ekstraksiyon için az miktarda kalsiyum karbonat (sıcaklık 20 derece) ile aseton içine koyun.
(3) Filtrelenmiş aseton özütünü 1 litre petrol eteri ve 100 mL aseton içeren bir huniye koyun ve ardından tabakalaşana kadar damıtılmış su ekleyerek yavaşça döndürün. Su tabakasındaki aseton ve suda çözünür safsızlıkların çoğu atılır ve geriye sadece petrol eteri çözeltisi kalır.
(4) Petrol eter solüsyonu tekrar distile su ile saflaştırıldıktan sonra, petrol eteri ve 0.01g oksalik asit içeren yüzde 200ml %80 metanol solüsyonu ile 5 defadan fazla temizlenir ve son olarak sarı-yeşil süspansiyon elde edilir. .
(5) Süspansiyonu susuz sodyum sülfat ile kurutun ve 3 cm kalınlığında sakaroz tozundan yapılmış bir kolona süzün. Daha sonra karotenoidleri çıkarmak ve sadece doğal klorofil içermelerini sağlamak için çöken pigmentleri temizleyin.
(6) Doğal klorofil içeren sakaroz kolonu iki katmana bölünmüştür, yeşil katman 4-10mm klorofil B katmanına sahiptir, diğer mavi katman 2-6mm klorofil A katmanıdır.
(7) Mavi tabakanın ortasında bulunan kısım (mavi tabakanın yaklaşık yarısı) etere konur, süspansiyon süzülür ve özütlenir, damıtılmış su ile temizlenir, sodyum sülfat ile kurutulur ve klorofil elde etmek için mutfak eşyaları ile süzülür. A.
(8) (6)'daki yeşil tabakanın orta kısmını çıkarın ve klorofil B eter solüsyonu yapmak için süzme ve yıkama için hızla etere koyun.
Ekstraksiyon sırasında nasıl ayrılır?
Kromatografi, organik bileşiklerin ayrılması, saflaştırılması ve tanımlanması için önemli bir yöntem olup, özellikle mikroanalizlerde yaygın olarak kullanılmaktadır. Meyve ve sebzelerdeki pigmentler esas olarak yağda çözünen karoten, lutein, klorofil ve suda çözünen antosiyanin içerir. Ekstraksiyon deneylerinde, benzer karışabilirlik suda çözünür antosiyanin filtreleme prensibini kullanabiliriz, bu da sırasıyla ince tabaka kromatografisini, kolon kromatografisini, yüksek performanslı sıvı kromatografisini (HPLC) beta-karoten, lutein ayırma için kullanabilir. ve sırasıyla üç tip pigmentin polaritesi nedeniyle zayıflamış olan klorofil, uygun şekilde tek bir organik çözücü veya genleşme maddesi ve elüsyon maddesi olarak farklı karışık çözücü oranları seçilebilir, Optimal ayırma koşulları belirlendi.
